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新闻资讯

诱发肿瘤动物模型的建立

2015-07-01
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原理:诱发性肿瘤动物模型是指研究者用化学致癌剂、放射线、致癌病毒诱发动物的肿瘤等。
实验材料:肿瘤细胞、小鼠 
试剂:无血清培养基质、3%中性甲醇、石腊等
仪器耗材:低温离心机、血球计数器、游标卡尺等

实验步骤  
一、肝癌 
1.二乙基亚硝胺(DEN)产生大白是什么鼠肝癌
(1)取标准体重250 g身边的密闭群作者鼠,雌雄不拘泥;
(2)按怀孕天数分笼家庭养殖。除给平民的食物外,饲而使癌物,即用 0.25%DEN水液体灌胃,摄入量为10 mg/kg,应当每周都每次,其他的书5天用0.025%DEN水液体放水瓶中,任其独立喝;
(3)共约4三个月可引起成肝癌;
(4)也能够 单用0.005%掺杂喝水中口吸服七个月致病肝癌。
2.4-2甲基氨基氮苯(DBA)诱因大鼠肝癌
(1)用含0.06%DBA的牛预混料饲养大鼠,牛预混料中维B2 不可以大于1.5~2 mg/kg;
(2)4~6月就会多的肝癌可能会导致成就。
3.2-乙酰蛋白质(2AAF)引发小鼠、狗、猫、鸡、兔肝癌
(1)给成熟大鼠含0.03% 2AAF标准青饲料;
(2)天天每均匀2~3 mg 2AAF(也可将2AAF混于油中灌喂),3~4月后有80~90%宠物所产生肝肺部肿瘤。
4.二乙基亚硝胺致病大鼠肝癌:
(1)用标准容量为每天0.3~14 mg/kg体脂率,混于预混料或生活用水中享有;
(2)6~9六个月后255/300大鼠情况了肝癌。
5.亚胺基偶氮甲苯(OAAT)可能会导致小鼠肝癌
(1)用1%OAAF苯氢氧化钠溶液(约0.1 ml含1 mg)涂在哺乳动物的两肩胛间肌肤上,隔日连续,两遍2~3滴,大部分涂100次。
(2)测试后7~8周即而展现第1 个肝癌症,5个月左右可会致小鼠肝癌症约55%。
    (3)或用2.5 mg OAAT易溶于葵瓜子油中,给C3H小鼠肉里注塑4次,每人每天间距10天,也可会致成肝癌。
     6.黄曲霉素导致大鼠肝癌
      (1)一周精饲料添加剂中含0.001~0.015 ppm,掺拌在精饲料添加剂中喂6六个月后,肝癌会致率达80%。 
二、食道癌 
      1.甲基胆蒽诱因小鼠直肠癌
      (1)取20 g时间的小鼠,无茵微创手术下,在腺胃和粘膜面穿挂含甲基胆蒽(MC)线结。
      (2)含MC的线结是用普通级细线,在两端打节后,将线结放入盛有MC小钢化玻璃试管路,在纯酒精灯上微微一笑加热,使MC汽化渗透线结。MC氧化还原电位为0.05~0.1 g 20-甲基胆蒽内浸没10~20根线。
      (3)小手术埋线后4~九个月可加重取得成功食道癌。
      2.有误称亚硝胺引发小鼠食道癌
      使用量为0.25 ml/kg体重增加,3月后全都家禽遭受前胃乳晕状癌,7~8月后有85~100%遭受前食道癌。北京种最太敏感脆弱。A系次之,615系小鼠太敏感脆弱性最次。
      3.甲基亚硝基醋酸钠尿素液加重小鼠食道癌
      给BD大鼠食用中放甲基亚硝基冰醋酸磷酸二氢钾,服用量为2 mg/kg权重,一天食用5次,520天内全部的大鼠均进行了腺直肠癌。 
三、食管癌 
      1.甲基苄基亚硝胺(MBNA)造成大鼠食管癌
      (1)取斤算100 g这些的Wistar大鼠;
      (2)任其吃用含甲基苄基亚硝胺的喝水,并将MBNA掺加饲料添加剂中使一周运动量量达0.75~1.5 mg/kg脂肪率;
      (3)80~100天可引起成食管癌。
      2.二烃黄樟素(Dihydrosafrole)可致大鼠食管癌
      (1)二烃黄樟素都是种备制酒的调制品,在大鼠词料添加入几十万分第二千五百至一万(2500~10000 ppm)黄樟素,就能引发20~75%的食管癌。
      3.甲基苄基亚硝胺可致大鼠食管癌
      (1)用0.2%或0.005% 的甲基苄基亚硝胺水氢氧化钠溶液,给绿色经口灌喂,一天到晚有一次,大鼠灌洗含量为1 mg/kg标准体重;
      (2)至第27天即发觉案列食管囊状瘤,158天发觉第案列食管癌, 17个月食管癌的有比率为53%。
      四、1.肺癌 
      1.二乙基亚硝胺(DEN)促使小鼠癌症
      (1)新手鼠每星期皮内打1%DEN水普通的水溶液有一次,每一次分子量56 mg/kg,DEN总分子量可达到868 mg;
      (2)关注精力为100天上下时,发癌率led光通量40%。
      (3)DEN总分子量满足1176 mg,观查的时间为一段时间的样子时;发癌率能够达到94%。
      2.乌拉坦引起肺腺癌
      (1)小鼠(A系, 1~11/10月龄)很大的鼠神经敏感,每当每只腹腔传递10%乌拉坦生理性氯化钠液0.1~0.3 ml,时间间隔3~5日再注,共注2~3个月大,每只小鼠需求量约为 100 mg;
      (2)注后3个月大肺腺癌形成率是100%,然而绝大多数为单发性,这个致病瘤为原发癌。
      3.苯并芘促发肺腺癌
      (1)猴气管外加入3,4-苯并芘(苯并花为3~15 mg与等量之Fe2O3搭配液),每星期1次,共10次;
      (2)6只猴有2只致病肺的鳞状上皮癌。
      4.硝酸钠铵气溶胶可能会导致肺腺癌
      (1)用磷酸胺气萃取剂给100只大鼠吸进;
      (2)13十一个月后全部大鼠都突发了肺腺癌。
      5.甲基胆蒽引起肺腺癌
      (1)用0.2%明胶作浮动剂将甲基胆蒽结合后给金地鼠气钢管内进入,两遍0.1 ml(含甲基胆蒽 5 mg)每天一起,共6次;
      (2)53周后有62.5%甲壳动物进行了肺癌患者。
      五、鼻咽癌
      1.二甲基胆蒽(MC)致病大鼠鼻咽癌
      (1)取口径2~3 mm的硬质的塑米管,在工业酒精灯上文火拉成球形,每段宽约3.5 cm,管道内部填以心得体MC。
      (2)小管两端用火关闭,预防药物剂量外溢,基础科学用刺痛数孔,使MC能打小妃外溢。
      (3)取网站权重120 g左右两的白色鼠,雌雄均可,乙醚麻醉药后,由前鼻道将综上所述含MC的可塑料小管放进去鼻道,利用前鼻道较小管粗端为小的的特点,冷静分析使劲儿,致使小管所有 到鼻道内,其尖部能达到鼻咽腔。不需外加紧固,就能使小管常年留于鼻道内。
      (4)待到既定耗时(一年后及上文),或昆虫及时消失时,到其鼻咽部,10%福尔马林特定,脱钙后,石蜡包埋,做间隔薄片。发癌率led光通量60%及上文。
      2.二乙基亚硝胺滴鼻法引起鼻咽癌
      (1)取120 g前后大白图片鼠,雌雄均可,乙醚局部麻醉后,用磨平针尖的6号针头,过去鼻腔缓缓的复制,针尖相当于鼻咽腔;

      (2)经填充器穿刺用1%吐温-80新配的 33.3%DEN混悬液0.0 2 ml(含DEN 6.7 mg)每星期1次,共15~20次,可促发成鼻咽癌。 


 六、官颈癌 

1.二甲基胆蒽(MC)致病子宫
取雌性小强鼠,以附有0.1 mgMC的棉毛纱结在生物不局部麻醉的的状态下,有效利用于阴道里面增大器及磨纯的弯针,将线穿入子子宫。经右宫角后背穿上去,使线结确定住于子子宫口。线的别的端则确定住于后背身体肌肉,缝皮脸部皮肤,挂线过后,同一天慢慢多次皮下注射青霉素2~3天。主要是防止果酸换肤感然。至需要时长(两年左右两边)处死生物,子子宫企业用10%福尔马林确定住,石蜡包埋,多次薄片。


 七、小肠癌 

1.二甲基苄肼(Dimethlhydrazine,DMH)可致鼻咽癌
(1)给4周龄的雄性腻子鼠,肉里注入二甲基苄肼(Dimethlhydrazine,DMH)一周多次,多次21周,总是 DMH21 mg/kg;
(2)第三一次性给药后1~4周,处死植物;
(3)降直肠关键部位用Bouin液固定位置,脱干,石蜡包埋,切块。所用到的之DMH先组成每100 ml含 400 mg的母液,并加EDTA37 mg,用氢空气氧化纳(0.1 N)液将pH调至6.5备用电源。


注意事项 

1.要设置不一样的试验组和差表组, 每组小动物数一样 为 5-10 只;
2.一样打疫苗良性淋巴良性肺部淋巴肿瘤6-8 周后,小鼠的良性淋巴良性肺部淋巴肿瘤可衍生至内径为 15-20mm ( 即小鼠会频临去世) 时, 可目光取血,破乳血清并存放血清, 处死小鼠, 取良性淋巴良性肺部淋巴肿瘤团体机构机构抓拍, 取这位置良性淋巴良性肺部淋巴肿瘤团体机构机构作 急冻团体机构机构聚集切片( 或- 80℃ 存放), 作一定的免役团体机构机构药剂学染料 , 取这位置良性淋巴良性肺部淋巴肿瘤团体机构机构用3%普通的甲醛含量加固, 石腊包埋, 作常用HE 染料。

其他说明
1.清香胺及偶氮活性染料类有害物的特征
      (1)基本上要长久、过多给药就要致癌物;
      (2)肿癌高发初是远隔意义位置的器管如膀胱、肝等;
      (3)有凸显的种属的差异;
      (4)其这种也不是直接性有害物,有害是是因为其某些代谢率有机物的帮助;
      (5)其致癌性效果恰恰受有营养或缴素的影向,譬如,奶黄仅在以丢失血清质和核黄素的饲料添加剂喂饲大鼠时才造成肝癌,而是雄性大鼠较敏感度,邻位氨基偶氮甲苯则易起雌性大鼠的肝癌。
      2.亚硝胺类的致癌性结构特征
      (1)致癌物物质性强,小极量做次给药便可致癌物物质;
      (2)对多重各种各种动物(是指猴、豚鼠等很容易加重癌症的各种各种动物)的更多生殖感觉器官(是指食管、脑、鼻窦等很容易致使癌的生殖感觉器官)能导致癌症物质,还会可不可以经过子宫导致癌症物质,如给孕妇大鼠以二乙基亚硝胺(Diethy lnitrosamine,DEN)可相比快地致使仔鼠的面神经胶质神经元瘤;
      (3)享有多种格局的亚硝胺有比较明显的内脏器官亲和性,举个例子二甲基亚硝胺等相交的衍生物物常使得肝癌,不相交的亚硝胺如甲基苄基亚硝胺常造成食管癌;在大鼠,二丁基亚硝胺能使得膀胱癌,二戊基亚硝胺能造成肺癌患者,而N-甲基-N-硝基-N-1-亚硝基胍则能使得肠道癌。
      3.黄曲霉黑色素的得癌优点
      (1)黄曲霉毒副作用的毒副作用比较强,好大极量(1mg/kg增重)既能使狗、幼龄大鼠、火鸡或小鸭丧命;
      (2)其至癌性性也较强,面值最小至癌性用量比亚硝胺还得小数百倍,是已知a药剂学至癌性物中用处最废者;
      (3)它能会致不同宠物(从鱼到猴)的肝癌,也可带来肾、胃及小肠的腺癌,滴入气管中可带来肺鳞状癌细胞癌;
      (4)植入肉里可出现位置的肉瘤,还会有评估因为,它可出现泪腺、乳线、子宫卵巢等各种地方的肿癌。
      4.任何
      在动物界實驗中已经确保:乙硫氨酸可可能会导致大鼠肝癌;乌拉坦(氨基甲酸乙酯,C2H5O-CONH2)、氨乙胺可给予小鼠的肺腺癌;点卤代烃如四氯化碳、氯仿等可给予大鼠或小鼠的肝癌。
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