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細胞凋亡或称程序性细胞死亡（PCD）是受基因控制的一种主动性细胞自杀过程，在形态学和生化有其明显的特征，是有别于细胞坏死的细胞死亡方式。研究细胞凋亡的方法有很多，如形态学观察，琼脂糖凝胶电泳，原位末端标记法，流式细胞仪检测等。

细胞凋亡时，形态上，早期细胞核固缩，染色体边集在核膜内侧显新月体形，核碎裂；细胞体积变小，细胞浆和细胞器密度增高；线粒体正常或轻微肿胀；细胞膜皱折、卷曲，但早期细胞膜仍保持完整；细胞膜出泡，芽生形成膜包裹的凋亡小体，内含完整的细胞器和核碎片。在组织中，凋亡小体常迅速被邻近细胞吞噬，由于细胞内容物不外溢，故周围组织中无炎症反应。而细胞坏死时，细胞体积变大，线粒体明显肿胀，在早期细胞膜的完整性即被破坏，胞浆内容物外泄，引起局部炎症反应或组织损伤。核的变化发生较晚，主要是核溶解和消失。无凋亡小体形成。

    形态特征学是监定细胞核凋亡最可以信赖的做法，通常有一般光电器件反应光学显微镜观查探究探究做法，散射手机光学显微镜观查探究探究做法和荧光光学显微镜观查探究探究做法等，左右解释一般光电器件反应光学显微镜观查探究探究做法中的HE刺绣法或是荧光光学显微镜观查探究探究做法中的吖啶橙刺绣法和吖啶橙/EB刺绣法。

组织细胞凋亡判断策略

的方法一 苏木素——伊红染色剂剂（HE染色剂剂法）
【原理】苏木素容易被氧化，其氧化产物苏木红与铝结合形成一种带正电荷的蓝色色精，与带负电荷的脱氧核糖核酸酸根吸附而使细胞核染色。染色后必须进行分化（differenciation）和蓝化（blueing）处理。所谓分化，就是用某些试剂，将过度染色的或不需着色的组织成分上的颜色除去。所谓蓝化是指用明矾苏木素液深染细胞核后，通过盐酸乙醇分化，切片从酸性环境中（此时，切片呈红褐色）转移至流水中使之变蓝的过程。
伊红Y（四嗅荧光素二钠盐）是一种酸性染料，可使细胞的胞浆染成粉红色。

形式二 吖啶橙着色法
【原理】吖啶橙是最经典的灵敏的荧光染料，它可通过与DNA和RNA的连接碱基对和磷酸盐基团结合，使细胞中的DNA和RNA同时染色而显示不同颜色的荧光。吖啶橙在稀溶液中呈绿色；在浓溶液中，由于出现二聚体和多聚体而呈现橙红色。由于DNA是高度聚合物，吸收荧光物质的位置较少，故发绿色荧光；而RNA聚合度低，能和荧光物质结合的位置多，故发红色荧光。

措施三 吖啶橙/EB双染色剂法
【原理】用吖啶橙染色可以检测细胞凋亡，但不能区别活细胞和死细胞。溴化乙锭（EB）仅着染死细胞，可使DNA染成桔红色，而仅很弱地结合RNA使之呈红色。因此将吖啶橙和溴化乙锭混合使用，可根据两种染料的吸收情况鉴定死细胞和活细胞。

方式 四 琼脂糖凝胶的作用电泳法
【原理】在细胞凋亡过程中，内源性核酸内切酶被激活，该酶优先作用于连接DNA的核小体间区域，将DNA链切割成为180～200bp或其整倍数的片段。将这些DNA片段抽提出来进行琼脂糖凝胶电泳，即可出现梯状电泳图谱。坏死细胞的DNA随机降解，并伴组蛋白的降解，故在凝胶电泳时呈模糊、弥散膜状条带。

办法五 原位尾端标上技巧
细胞凋亡中，染色体DNA的断裂是一渐进的分阶段的过程，其首先在内源性核酸水解酶的作用下降解为50~300kbp的DNA大片段。然后大约30%的染色质DNA在Ca2+和Mg2+依赖的核酸内切酶作用下，从核小体间将DNA链切割成为180～200bp或其整倍数的寡核苷酸片段。染色体DNA双链断裂或单链断裂而产生大量的粘性3'-OH末端，可在脱氧核糖核苷酸末端转移酶（TdT）的作用下，将脱氧核糖核苷酸和荧光素、过氧化物酶、碱性磷酸酶或生物素形成的衍生物标记到DNA的3'-末端，并通过一定的显示系统使之显示出来，从而可对完整的单个凋亡细胞或凋亡小体进行原位染色，这类方法称为脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记法（terminal -deoxynucleotidyl transferase mediated nick end labeling, TUNEL）。由于正常的或正在增殖的细胞几乎没有DNA的断裂，因而没有3'-OH形成，所以很少能够被染色。TUNEL实际上是分子生物学与形态学相结合的研究方法，能准确地反应细胞凋亡典型的生物化学和形态特征，并可检测出极少量的凋亡细胞，灵敏度远比一般的组织化学法和DNA ladder测定法要高，且能早期显示尚未发生典型形态变化的凋亡细胞，是检测单个细胞早期出现凋亡现象的较好方法，可用于石蜡包埋组织切片、冰冻组织切片、培养的细胞和从组织中分离的细胞的细胞形态测定，因而在细胞凋亡的研究中被广泛采用。
【原理】在TdT酶的作用下，生物素（biotin）标记的dUTP可以参入到凋亡细胞DNA断链的3'-OH末端，并可与连接了过氧化物酶（POD）的亲和素（streptavidin）特异结合，POD可催化底物DAB产生很强的颜色反应，特异准确地定位凋亡细胞，因而在普通光学显微镜下，即可观察和计数凋亡的细胞。

的方式六 亚G1峰判断法
【原理】处于增殖周期中的细胞，根据其所处不同周期时相（Go/G1、S、G2/M），其DNA含量分布在2n～4n之间。凋亡细胞的重要特点就是细胞凋亡过程中核酸内切酶在DNA分子核小体间的降解。在乙醇固定和去垢剂处理后，凋亡细胞的细胞膜通透性增加，导致小分子DNA漏出，核DNA含量下降，以DNA特异性荧光染料染色后，形成一个DNA含量小于2n（即小于G0/G1期细胞）的分布区。 用流式细胞仪分析，可以发现在DNA直方图上正常二倍体细胞的Go/G1峰前出现一个亚二倍体峰（Sub-G1峰，即AP峰--apoptotic peak, 也叫凋亡峰）。代表凋亡细胞。根据此亚二倍体峰可以计算凋亡细胞的百分率。

的方式七  Annexin V-FITC凋亡检则

    【作用】健康活内部带负电的磷脂酰丝氨酸（Phosphatidylserine,PS）最靠近内部膜的跟部，但在内部凋亡的前面的，PS可从内部膜的跟部拖动到内部膜的表层，爆漏在内部外室内环境中。AnnexinⅤ不是种原子量为35-36kD的Ca2+依赖于性磷脂通过蛋白酶，能与磷脂酰丝氨酸高感召力特情人通过。以标注了FITC的AnnexinⅤ用于荧光电极，巧用普鲁士蓝染色内部仪或荧光显微镜可检则内部凋亡的的发生。碘化丙啶(propidineiodide,PI)不是种核酸活性染料，它不可能经过完善的内部膜，但在凋亡中肺麟癌的内部和的发生继发死亡的内部，PI够经过内部膜而使内部核红染。将Annexin Ⅴ与PI连接适用，行将凋亡前面的的内部和肺麟癌的内部与继发死亡的内部分清开。

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