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亲和纯化是将具有亲和作用的两种分子中的一种分子与固体例子或可溶性物质共价欧联,可特异性吸附或结合另一种分子,使另一种分子从混合物中得到选择性分离纯化的方法称为亲和纯化。
亲和层析
亲和过滤(膜分离)
亲和分配(双水相萃取)
亲和反胶团萃取(反胶团萃取)
亲和沉淀(沉淀)
亲和电泳(电泳)
经过一次处理可得到高纯度活性物质;
设备要求不高、操作简便、特异性强、分离速度快、分离效果好、分离条件温和;
亲和吸附剂通用性较差,专用的吸附剂;
亲和作用机理,特别是蛋白质亲和作用机理尚不清楚;
蛋白质表面存在一些凹陷或凸起结构;
上述结构恰好能使某些小分子进入到其中,形成构象上的钥匙与锁的关系;
亲和作用不仅依靠结构上相似性,还需要多种力的相互作用;
串接亲和纯化是一种能快速研究体内蛋白质相互作用的新技术,经过两步特异性亲和纯化,可快速得到生理条件下与靶蛋白质存在真实相互作用的蛋白质。TAP方法最初用于酵母中,因其具通用性、高效性、高纯度及假阳性低等特点得到了快速发展,至今已成功运用于许多其他生物。现主要介绍TAP方法的原理、TAP标签及其在不同物种中的应用。串联亲和纯化的优点在于,一方面是用亲和柱结合标签,而不直接作用于目的蛋白,纯化过程不用过多考虑靶蛋白的性质;另一方面是采用串联标签,经两步纯化,有效减少了杂蛋白含量,为后续蛋白分析减少了工作量。
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