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1 筛选获得的大环肽有重复的序列吗?
刘超博士:确实存在这样的情况。在我们的测序分析中,我们发现了一些重复的序列。有时,这些重复可能意味着某个序列被多次筛选出来,导致拷贝数增加。可能有三个或四个序列指向同一个大环肽。对于这些具有相同序列的情况,我们将在后续的SPR验证或合成过程中给予重点关注。
2 如果可以提供靶点蛋白,我必须携带列出来的GST或者Fc标签吗?是否能换成其他的纯化标签吗?
刘超博士:可以通过下图看到文库的基本信息,环肽本身带有His标签的,标签是为了辅助环肽的提纯过程,除了His标签之外,其他各种标签也可用于靶点蛋白的纯化。这些靶点蛋白上的标签的关键作用是固定靶点蛋白,确保其在实验过程中的稳定地固定在beads上。
3 想问一下mRNA的环肽展示技术可以和生物合成相结合?利用植物中的环化酶去环化?
刘超博士:可以的,环化酶是通过两个环肽,类似直播中提到的半胱氨酸成环的。在我们实验室,环化是通过化学方法进行的,确保了环肽的完整性和功能性。环化完成后,我们会进行纯化步骤,以确保获得的环肽是完整且可以顺利结合的。这一纯化过程对于保证环肽的质量和活性至关重要,确保了我们能够提供高质量的环肽产品。
4 你们如何进行QC检测的?
刘超博士:我们采用的是高通量测序技术,目前还在开发LC-MS的方法。在实验的早期阶段,我们通过银染技术进行定性分析,以确保翻译过程中多肽的生成和翻译的顺利进行。在mRNA/cDNA与大环肽共轭物阶段,我们利用二代高通量测序技术,这有助于在筛选前确保文库的质量,并提供更准确可靠的数据。
5 请问通常mRNA筛选一轮需要多久?
刘超博士:从DNA文库到完成筛选和测序的整个流程,我们预计需要大约5至6周的时间。这个时间框架主要是由于文库测序阶段相对较长,大约需要两周左右。实际上,如果只考虑操作过程,完整的操作可以在两周内完成。
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