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动脉粥样硬化动物模型制作过程——开运电竞 医药

2015-07-17
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 一、常用动脉粥样硬化动物模型的比较
主动脉粥样硬底化仿真模特常用的两栖宠物有鼠、兔、猪、狗、猴,依可以达到比较好两栖宠物仿真模特的规定要求最应用的是兔、猪和鼠。很多两栖宠物促进形式和养成本质特征的之间的关系。

昆虫不一样
急病介导办法
    特    征
肯定發生,或高脂美食 
高脂伙食高脂血症,肥胖者
小白兔
高脂饮食 高脂血症,肥嘟嘟
血栓性血官壁侵害棉纤维偏厚,粥样软化
美国兔
非脱离性内皮受损肿瘤细胞玻纤子宫内膜增宽
 去传染病变,子宫内膜肥厚
高脂营养饮食,壁的危害极似人类祖先退变
高脂营养饮食 
高脂膳食结构好发冠状血管固化

二、动脉粥样硬化动物模型制作过程
常见介紹猪和兔五种猎物模式的自制步骤。因而比较容易才能得到、费用低、工作十分简单,通常先选猎物。

1、猪的小动物模式

健康的雄性中国人家庭型猪,按数据分析学必须要,自定总数。5~6月龄,称其网站权重并记下,独立分类科学试验组和较组,每组总数一样 ,单笼养殖技术,较组只给地基理论理论猪饲草,科学试验组地基理论理论猪饲草每只哺乳动物按25g·kg-1/d分四次寄予,中午在极富地基理论理论猪饲草中拌10%鸡鸡蛋黄粉和1.2%胆固醇升高高,待吃了后再添足猪饲草。每个月表明网站权重变化规律原因改变猪饲草量。2组均独立摄水。为使冠脉粥样硬底化模特更临近人的疾病,可通过外源性养殖技术法,于一7周停喂胆固醇升高高和鸡鸡蛋黄粉4周,到第21周再找回,并不是改变猪饲草量,直到第29周。

2.兔的各种动物模形

兔先选日本队小灰兔或新加坡白兔(所用作內膜剥脱造型图片)。8周龄或成年人兔,称其权重记录好,随即分成小组,单笼养殖。一周给固醇1.5g,凌晨以一点核心预混料厂拌食,待饭后后,再添足核心预混料厂(一周每只120g),对比组则只供核心预混料厂,三组均随心所欲摄水,养殖10周。

及以上均为高脂膳食结构法,还有还有很大种较种类的新娘造型法是剥脱子宫内膜法,其方法是建议选用目前我国的大耳白兔,一天只给0.5g蛋白质和大油1.5g,鸭蛋黄5g,1周后经右股浅冠脉,将3.5F球囊扩长软管插至腹主冠脉20cm,球囊充液扩张至5个豪迈压放缓拉开,总是3次。

三、相关公式检查测量

动脉粥样硬化的模型检测,大体包括病理形态学检查,免疫组织化学检查以及生化检查三个方面。

1.病理形态学观察
为了对比,猪在14~29周,兔在5~10周,处死两组动物(每周各一只),作饲养过程的经过观察。
(1)肉眼观察主动脉沿纵轴剪开,苏丹Ⅲ、Ⅳ混合染色,投影格子计数法分别计算每条主动脉内膜总面积,胸、腹主动脉内膜面积以及苏丹Ⅲ、Ⅳ染色阳性的脂质条纹及隆起的纤维斑面积,求出各类病变面积百分比。冠状动脉自心脏剥下,沿纵轴切开,苏丹Ⅲ、Ⅳ混合液染色,按上述方法计算每条冠状动脉内膜及其病变面积,求出病变面积百分比。在实验组(猪)14周时脂质条纹面积和纤维斑面积的百分比分别是9.64%和1.56%左右。冠状动脉在主支近端1/3处可见纤维斑。

(2)光镜观察从胸主动脉和冠状动脉典型病变处分别取材,常规石蜡切片,厚4μm,HE染色。用目镜测微尺于200倍镜下测量动脉纤维斑或脂质条纹的最大厚度及中膜厚度,求其厚度比值,两组的值应有显著的差异。Masson染色片,光镜下400倍计数三个视野的腹主动脉和冠状动脉左前降支纤维斑内胞浆红染的梭形细胞(视为平滑肌细胞)数。其值在两组间亦应有显著的差异。此外,尚可在实验组见到内膜缺损或裂隙。

(3)电镜观察动脉处死后迅速取材(部位同光镜),2.5g戊二醛及1%锇酸双重固定,常规制备样品,以超薄切片机切片,乙酸钠,柠檬酸铝染色,透射电镜观察。扫描电镜样品经逐级酒精脱水,临界点干燥,镀膜后观察。在动物模型组应见到内皮细胞变性坏死脱落,见到髓磷脂小体,细胞间连接变直变宽,内皮下间隙扩大,有较多的平滑肌细胞(SMC)和泡沫细胞。泡沫细胞胞质内密集成群分布的大脂滴和胆固醇结晶,结晶使细胞核移位,胞体肿大,部分泡沫细胞崩解,如图1所示。线粒体肿胀变性,多数SMC胞浆内充满大量细胞器(粗面内质网,高尔基体等)。但肌丝成分较少,间质可见弹力纤维增生,细胞外脂质沉积。

图1 猴大动脉硬化灶电镜图

喂饲一年形成的高胆固醇血症猴的大动脉呈高度动脉粥样硬化斑块(fatty streak)表面,内皮细胞呈复杂的凸凹不平。一部分细胞接合分离、巨噬细胞祼落、血小板粘着凝集。

2.免疫组化定性定位观察
目前市场上有多种免疫组化所需的抗原抗体提供,针对LDL的动脉粥样硬化斑可采用组化分析,用相应的LDL抗体为第一抗体的PAP法观察LDL在动脉粥样硬化病灶内的分布。LDL免疫活性阳性的颗粒主要分布在泡沫细胞周边,在纤维斑块内,LDL颗粒呈弥漫性分布,在病灶深部内弹力板附近,有大量LDL颗粒聚集成带状。

3.生化指标检测
在动物饲养全过程中,每周应进行一次血脂测定。可在耳垂静脉取血或心脏直接抽血。常测指标有血清总胆固醇(TC),某油三酯(TG),低密度脂蛋白(LDL),高密度脂蛋白(HDL),载脂蛋白AⅠ(ApoAⅠ),载脂蛋白B(ApoB)等,其动物模型,除ApoAⅠ和HDL外,其他各项指标与对照组比较出现不同程度的升高,尤其以TC、LDL、ApoB最为显著。此外,血小板膜流动性(PMF)及丙二醛(MDA)也可用作参考指标。

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