一、技术简介

BiFC是由Hu等在2010年第一简讯的属于更直观、飞速地诊断对方蛋白质在活上皮细胞中的标记和共同做用的创新技术性。

美迪西建立和完善了PROTAC生物筛选与测试平台，开运电竞 部具有成熟的PROTAC功能检测及验证技术，利用融合蛋白表达及双荧光分子互补（BiFC)等技术，建立了高通量PROTAC 筛选平台，用以筛选靶向降解致病蛋白的PROTAC小分子。

有报道在GFP的两个β片层之间的环结构（loop）上有许多特异位点可以插入外源蛋白而不影响GFP的荧光活性，BiFC技术正是利用该荧光蛋白家族的这一特性，将荧光蛋白分割成两个不具有荧光活性的分子片段，再分别与目标蛋白连接。如果两个目标蛋白因为有相互作用而接近，就使得荧光蛋白的两个分子片段在空间上相互靠近，重新形成活性的荧光基因而发出荧光。在荧光显微镜下，就能直接观察到两目标蛋白是否具有相互作用，并且在最接近活细胞生理状态的条件下观察到其相互作用发生的时间、位置、强弱、所形成蛋白复合物的稳定性，以及细胞信号分子对其相互作用的影响等，这些信息对研究蛋白质相互作用有重要意义。

在这之后进展出的多色荧光互补性技(multicolor BiFC)，既能同時查重到很多球脂肪酸符合体的建成，还能对有所不同球脂肪酸间所产生互为效用的快慢展开比.这个工艺工艺不是都要特殊化的的设备，互为效用的球血清酶从来不是都要格外的本体论用量。为此，BiFC工艺工艺已被知名上比较多科学标本室选用，在活细胞核内发现球脂肪酸的互为效用。本科学标本室顺利完成运用该工艺工艺论述转录系数c-Jun、ATF2和c-Fos在原代神经末梢元中的的竞争性互为效用。BiFC系统低于这几个资源优势特点使其对待科学研究氨基酸质双方功效拥有独特性的资源优势：1、能在体视显微镜观察下真接了解到血清完美做用另一方面不依懒于任何次级现象；2、该完美做用都可以在活神经元中做出了解，祛除去伴随神经元裂解或固定住几率引致的假弱阳结局；3、血清质在相似性生理问题状态的环境下展示，展示关卡及性能指标如译成后突显更大地非常接近于内源血清；4、不所需血清质有尤其的策略配置比例，能判断到其他亚群血清质间的完美做用；5、多色BiFC高技巧不单能还判断到很多血清质混合体的变成，还够对其他血清质间导致完美做用的高低做出较；6、BiFC高技巧除去荧光倒放体视显微镜观察外，不标准特别的仪器。实验性性简单的、灵活、客观，并适用性于原核、真菌感染、植被、爬行动物等好几种进行、体细胞. 该技木的成熟的与发展趋势肯定会为蛋清酶质组学、蛋清酶质上下级意义连锁加盟图的创立产生福音网. 如果，该技木与多半检查测量蛋清酶质上下级意义的技木都一样，也具有着假阴性化和假弱阳的情况，必须要在实验性性中认真思考查验。

二、实验步骤

1. 将重要性人类基因加入到具有刺激性N精彩片断或C精彩片断的各种媒介中，共建成就结合血清表达方法各种媒介2. 转染肿瘤细胞，荧光显微镜下观察动物能不有相互之间的作用。

三、应用实例

Fig1: Potassium deprivation increases BiFC signals formed by JunVN173 and ATF2VC155. CGNs were transfected with plasmids encoding JunVN173 (JunVN) and ATF2VC155 (ATF2VC) together with ECFP. JunΔL3VN were served as a control. After 16 hr, CGNs were switched to 25K, 5K media for 1h. Photos were taken on a fluorescence microscope at a magnification of 200×. The white arrows indicated the BiFC signals (Venus fluorescence). The transfected cells were lysed for Western blotting by anti-Flag and anti-ATF2 (20F1 CST). CFP were reprobed for normalizing the tranfection efficiency. The percentage of CFP-positive cells exhibiting Venus fluorescence was scored. Data were presented as means ± S.E., n=3, Student’s t test, p<0.05.