注射剂解析工艺
❖ RT-qPCR

海洋生物具体分析策略
❖ RT-qPCR: mRNA
❖ ELISA: mRNA表达蛋白；mRNA疫苗免疫原性（效价）
❖ ELISPOT: IFN-γ水平

药物制剂健康危险性研发
❖ 给药部位刺激试验（结合重复给药毒性试验进行或单独开展兔刺激性试验）
❖ 豚鼠主动过敏试验
❖ 兔体外溶血试验

注射剂研究分析方式
❖ RiboGreen

菌物探讨策略
❖ qPCR: mRNA
❖ ELISA: mRNA表达蛋白
❖ ELISPOT: IFN-γ水平
❖ ECL: ADA

药品很可靠性研究探讨
❖ 给药部位刺激试验（结合重复给药毒性试验进行或单独开展兔刺激性试验）
❖ 豚鼠主动过敏试验
❖ 兔体外溶血试验

企业分布不均应力测试（大鼠）

安全管理药学做实验的时候
❖ SD大鼠FOB, SD大鼠呼吸系统安全药理，猴心血管系统安全药理（伴随）

基础医学论述时段.
❖ 肿瘤新抗原的识别和筛选
❖ mRNA核酸序列设计和修饰
❖ 递送系统优化

临床试验前研究探讨阶段性
❖ 动物模型选择是核心和关键

编号癌肿抗原的mRNA编码序列：

SEO优化mRNA的译文资料和相对稳确定
❖ 5‘端加帽（5’Cap)和修饰：常见的如通过噬菌体聚合酶将帽类似物(m7GpppG)添加到mRNA的5‘端，提高mRNA的稳定性和翻译效率；
❖ 5‘-UTR和3’-UTR修饰：5‘-UTR和3’-UTR包含各种影响mRNA稳定性、翻译和定位的调控序列；
❖ 开放阅读框架(ORF)中的密码子优化，提高mRNA的稳定性、调控翻译速度和蛋白质产量；
❖ Poly(A) tail修饰：Poly(A) tail是基因表达的主要调节因子，通过与5‘ cap协同作用来调节mRNA的翻译，并参与调节mRNA的稳定性。

免役原性的设定
❖ 体外转录mRNA的纯化、转录条件改变、核苷酸修饰、添加额外佐剂等。

防疫针佐剂（可选装含有）：

❖ TLR激动剂：如TLR4激动剂MPLA、TLR7激动剂Imiquimod；
❖ STING激动剂；
❖ TriMix（一种编码CD40配体、CD70和TLR4三种蛋白的鸡尾酒mRNA）；
❖ 粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)；
❖ 一些mRNA载体，如阳离子脂质和鱼精蛋白。

mRNA肺炎疫苗的递送操作系统:

脂质納米颗粒肥料(LNP)递送整体
❖ 目前应用最广泛的mRNA递送递送，主要由可电离的氨基脂质、聚乙二醇、磷脂和胆固醇组成；
❖ 带负电荷的mRNA分子可以通过与带正电荷的脂质的静电相互作用稳定地输送到包裹在内核中，而不受细胞外RNase和内体的酶降解。

配位高聚物承载纳米技术递送系统化
❖ 多聚体或基于聚合物的核酸载体与LNPs相似，因为多聚体也可以带正电荷，并通过与mRNA的静电相互作用来转染mRNA；
❖ 常用的聚合物递送系统如聚乙烯亚胺(PEI)、聚l-赖氨酸(PLL)、聚酰胺胺(PAMAM)、聚β-氨基酯(PBAE)、氨基聚酯。

来源于多肽的递送模式
❖ 某些带正电荷的氨基酸能够通过静电相互作用吸附mRNA，以及细胞穿透肽(CPPs)能够快速内化穿过生物膜；
❖ 鱼精蛋白是一种典型的多肽载体，除了稳定地结合mRNA进行递送外，还可以作为佐剂来激活TLR7/8以诱导先天性免疫反应。

融合納米科粒递送平台
❖ mRNA癌症疫苗的递送还可使用多种组分混合制成的载体，例如脂质、聚合物、肽、外泌体和细胞膜等；
❖ 脂质/聚合物杂化纳米粒（LPHNs）：一般由可电离脂质、疏水聚合物和聚乙二醇脂质组成，可以通过组分和比例优化实现高转染效率；
❖ 阳离子纳米乳（CNEs）：由脂质和聚合物组成的水包油递送载体。

病毒是什么质粒递送模式
❖ 如腺病毒、甲病毒、仙台病毒、黄病毒和小核糖核酸病毒被用于mRNA的递送。

DC组织细胞递送体统
❖ DC是早期疫苗研究的重要递送工具，可以通过电穿孔将主要编码抗原的mRNA有效地导入DC细胞。

裸mRNA
❖ 直接注射裸mRNA：由于快速降解和细胞摄取较差，递送裸mRNA效率低下。

沙盘模型的选择战略：

❖ 通用型肿瘤疫苗，确认靶点同源性后，使用鼠源模型
❖ 个性化肿瘤疫苗，使用鼠源肿瘤细胞构建个性化疫苗，用鼠源模型验证
❖ 有MHC限制性的肿瘤疫苗，使用HLA人源化免疫健全小鼠
❖ 使用靶点人源化小鼠肿瘤细胞完成概念验证
❖ 使用HSC免疫系统人源化动物模型进行药效验证

mRNA役苗的基本给药手段涉及到：

❖ 皮下注射
❖ 皮内注射
❖ 结节内注射
❖ 肌肉注射
❖ 静脉注射
❖ 肿瘤内注射
❖ 鞘内注射