高通量筛选服务

高通芯片量筛分枝术介绍

• mtk量建立(HTS)是制剂发展中的这个重中之重高技艺，用到从氧化物库文件怏速精确有可能称得上制剂电学改善的得票数氧化物。该高技艺体系建设利用了临床药理学高技艺、原子核海洋怪物高技艺、细胞膜海洋怪物高技艺、计算公式机高技艺、工作管理高技艺相应工业半全自动化化管理高技艺等，实现了了制剂建立的怏速、高效率、氢化物发生器化、工业半全自动化化和建设科学化。由于高通芯片骁龙量挑选技术设备的进步，能够愈发短时间科学规范地挑选很多单质，故而加快推进药剂发觉的极限速度。美迪西动物学和药理学学部供应高通芯片骁龙量挑选服务保障，我国得到强悍的级联挑选小氧分子调控剂、身体的酶吸附性和受损细胞吸附性查重开发建设专业能力。
  美迪西的高通量筛选服务可以做：级联需求小分子结构克药制剂；身体之外酶抗逆性校正；身体外神经元催化活性检验；mtk量选择进行分析等。

  药物发现中的高通量筛选过程涉及筛选大型化合物库，以找到影响生物靶点的潜在候选化合物。这些候选化合物通常被称为“苗头化合物”^[1]。开运电竞 部拥有超过 3000 种化合物的库，化合物筛选能力可以是 200x384 孔板/周，也可以根据客户的需求进行定制。同时我们与 Selleck、MCE、Tocris和TargetMol 等提供化合物库的合作伙伴密切合作。

  高通量筛选过程可以通过各种方法来实现，包括读板器以及相应的软件来处理和分析所获得的数据。一旦发现这些潜在的“苗头化合物”，对高通量筛选数据的进一步分析还可以提供有关第一轮筛选期间获得的这些“hits”的潜在优化的信息^[1]。

级联筛分—小氧分子有机物仰药物

• 级联选购是类用量知道的时 中识別和选购先导有机物类别的一款测定方式方式，身为是一种层层次感的生物技术体耐腐蚀或类用量设计方式，往往适用选购类用量或有机物库以获得隐性的类用量先导有机物。这一些方式有另一个生物技术体学可溶性的级，事先选购隐性的类用量制定目标。在这种的时 中，可能会会知道这一些兼有提升空间的"先导有机物"，这一些有机物都可以进一个步骤研发被选为新类用量。

  

  開發小氧分子治理和改善剂还要更强的级联选择，来管用地区分与靶核蛋白质构建的无机化合物，确立对不还要的关联核蛋白质的保护性，并在河流下游技能测得中证件几丁质酶。靶标效验、定量分析开拓、三次筛分、ADME/Tox 和先导氧化物提高等领域越多越大规模适用 HTS 技艺。

体内酶活性氧在线检测

• 酶渗透性的影响是可不可以快捷设定缸体的身理功能表或疾病工作，激酶、蛋清酶和肽酶是最易见的类药靶点。利用率酶渗透性数据分析技术水平是可不可以快捷、高效、性价比最高地评价氧化物对计划酶的可以抑制力，然而选择开立有有潜力的得票数氧化物。

  

  酶活性检测的方法包括酶反应的底物、产物等，反应大多在均相的环境下进行。底物还原测量（ATP、NAD/NADP、SAM、乙酰辅酶A、肽、DNA、RNA 等）- Down 测定产品测量 - Up 测定

• 酶活性检测- 案例 1

  HTRF 测定-均相时间分辨荧光

  
  Donor=Eu and Tb
  Acceptor=XL665
  优点：（1）特女性朋友强，讯号本底比（signal/background ratio）高；（2）荧光手机信号高宽比稳固；（3）响应均相，通量高。缺点：（1）活性朋友免疫抗体成本低较高； （2）造成特定的靶点要有发展特女性朋友免疫抗体。

• 酶活性检测- 案例 2

  ADP-Glo 检测

  
  优点：(1) 精准较高；(2) 可不可以判断激酶本身的酶。

• 酶活性检测- 案例 3

  Z’-Lyte 检测

  
  优点：(1)高数据信息本底比，高通芯片量；(2)成本费低。缺点：(1)无发检则现象机理繁琐的酶；(2)易于评述任何有强大的自发性荧光的类化合物；(3)检测工具蛋白质酶后会经常出现假呈阳性数据信息。

• 酶分析方法开发- 关键因素

  酶分析方法优化和验证常采用酶滴定法、时间进程分析、米式常数测定、DMSO耐受性、Z-prime 测试和化合物验证等。
  

  酶滴定和用时进度解析注：任务栏（移动信号本底比）>3。

  

  ATP Km 和底物 Km注：挑选相似Km值的底物溶液浓度
  

  DMSO耐热力性：测试仪测定法中可以耐热力的最主要DMSO浓度值。注：DMSO 一般说来不低于 1%

  

  Z’：表示板的透亮性。σ=SD，μ=mean注：Z’>0.5 将身为酶法在线检测的 QC 细则
  

  单质检验：采用参考使用单质来验测检验的重新性注：IC50是指已更新值的5倍

  Plate layout：

  

  IC50 报告标准极限控制费率应以上 50%。更高值和极低值应在基本原理值的 15% 元IC50 的 95% 置信限应在 2-5 倍时间范围内。

体内细胞膜活力在线检测

• 细胞活性筛选是新药筛选中的常用方法，在细胞层面上评估化合物的活性和毒性，能够很好地模拟药物在体内的作用情况。基于细胞的检测已在制药行业的药物筛选中占据了一定的地位。这些测定能够通过功能表征潜在药物靶标在细胞中的作用以及评估药物先导化合物的特异性和功效来评估潜在药物靶标^[2]。美迪西的体外细胞检测服务包括：
  表型测定：細胞增值、迁徙、侵蚀性、凋亡、萎缩性凋亡、自噬等。 功能测定：下游信号如蛋白磷酸化、第二信使（Ca²⁺、cAMP、IP3、cGMP）。细胞中的蛋白质-蛋白质相互作用（PPI）：NanoBiT,NanoBRET,BiFC。
  

  表型测量

  

  第二信使-Ca²⁺

  

  淀粉酶酶与淀粉酶酶互为用处

• 细胞检测开发 - 细胞毒性测试

  仅使用高通量筛选不能完全评估潜在药物，因为此评估还需要进一步进行毒性研究。相反，高通量筛选对于消除在研究对生物靶标影响很小或没有预期影响的化合物上浪费的时间至关重要。通过利用这种自动筛选过程，可以一起筛选数百万种化合物，并消除没有效果或效果差的化合物^[1]。
  细胞毒性测试需要从细胞接种密度、培养时间、DMSO耐受性、Z-prime test、edge effect、化合物验证几个方面来考虑。

  1. 细胞接种密度

  组织细胞凝集力>80%不同于細胞硬度的板中的种子网細胞培植72~96一小时，CTG/CCK8查测神经细胞青春活力在波形时间范围内选泽 CTG/CCK8 无线信号的密度计算公式窗体（移动信号本底比）>2

  2. 培养时间

  选定 调优的容重和种子资源受损细胞在不一样的时刻点孵育细胞核/化学物质实用 CTG/CCK8 检验肿瘤细胞潜能拥有佳验测窗口期和统计数据效率的耗时点将适用于进步骤的工作菜单栏（数据信号本底比）>2
  

  3. DMSO耐受性

  区别含水量的DMSO与肿瘤组织孵育72至96几小时，CTG法检查肿瘤组织话力要留意：神经元检测工具中 DMSO 的含磷量一般而言底于 0.5%

  4&5. Z-prime test and edge effect

  QC标准单位：Z’>0.4，窗口最大化>2大部分顶部孔并不会应用于长时间教育培养

  
  

  6. 化合物验证

  呈阳性化学物质应该为借鉴统计资料的 5 倍

  Plate layout：

  

  

高通骁龙量筛分分析一下

• 高通量筛选分析流程图

  高通量筛选依靠自动化来快速测试大量化合物，高通量筛选中生成的大量数据需要强大的数据处理和分析工具。专门的软件和算法可以用于处理、分析和可视化结果，使研究人员能够识别潜在的“苗头化合物”或表现出所需活性的化合物。
  1. 判断升级优化（Z’、判断渠道、DMSO 耐受力性、可以参考有机化合物检验）2. 将第一个常用对数千种无机化合物去示范区实验以各种测试该旋光度的测定法3.还将实现正交检测法法以排除假阳性反应有机化合物4. 多数以万计的类化合物操作 HTS5. 暴伤率基本上会设有为0.1%到0.5%
  高通量筛选加速了药物发现过程，使其更具成本效益和效率，使研究人员能够快速筛选多种化合物，从而减少识别潜在候选药物所需的时间。HTS 通常是一个迭代过程，包含多轮筛选、命中验证和先导化合物优化。研究人员根据早期筛选的结果和经验来完善他们的化合物库和测定方法。

• 高通量筛选-案例

  PSMA:

  前列腺特异性膜抗原（PSMA）是治疗晚期前列腺癌（PC）和各种实体瘤的有希望的靶标。尽管 PSMA 靶向放射性药物治疗 (RPT) 已实现显着的成像和前列腺特异性抗原 (PSA) 反应，但积累的临床数据开始揭示某些局限性，包括无反应者亚组、复发、放射诱导毒性和 需要专门的管理设施。迄今为止，利用 PSMA 通过抗体、纳米药物或细胞疗法治疗 PC 的非放射性尝试已取得一定成功。 我们开发了高通量 PSMA 酶测定法来鉴定新的 PSMA 调节剂。
  

  底物滴定

  

  选取氧化物检查

  Z 因子测试和分析窗口测试

  

  
  使用384孔板进行测定验证，四块板的数据显示Z因子高于0.5，测定窗口高于10倍。

  苗头化合物识别

  

  
  总共使用100 x 384孔板筛选了30,000多种化合物，并在10天内完成，当将PSMA活性抑制设定为50%时，命中率约为0.8%。

分析

• 美迪西拥有着力量强大的无机单质论文检测开放和无机单质挑选学习能力。企业的建立能力素质能够 是 200x 384 孔/周，或结合企业的使用需求实施定制开发。供试品是高通骁龙芯片量类药选择的的物质核心，供试品库主要来源的化工复杂化性是所决定高通骁龙芯片量选择系统为什么要成功的英文的重中之重因素分析组成。各位与 Selleck、MCE 和 Tocris 等展示单质库的达成合作关系小伙伴紧密达成合作关系，内部管理都有大于 3000 种单质的库。

附表

• 来自 MCE（第三方供应商）的化合物库

  化合物库名称	规格和货号	描述
  50K 多样性库	50K  HY-L901	该库中的化合物通过相异性搜索（谷本相似性系数为 0.52）进行选择，以提供更高的多样性和更广泛的化学空间覆盖范围。
  UORSY筛选库	680K  HY-L0103V	UORSY 筛选化合物库包含约 680,000 种化合物。 该文库是通过聚合合成方法构建的，提供了高度多样化的化学结构。 库中超过85%的化合物具有类药的理化性质，超过35%的化合物具有“lead-like”的性质。
  生物活性化合物库 Plus	20K  HY-L001P	• 生物活性和安全性经临床前研究和临床试验证实。有些已获得 FDA 批准。 • 广泛应用于癌症、干细胞、神经信号、免疫等研究重点领域。
  多肽库	1.1K  HY-L105	• 包括生物活性肽、氨基酸衍生物和封闭肽。 • 多肽药物发现和疫苗开发的有用工具。
  1,000万虚拟类药多样库	10M  HY-L912V	MCE 的 40,662 个 BB，涵盖约 273 种反应类型，生成了超过 4000 万个分子。选择符合 Ro5 标准的化合物。移除掉不适当的化学结构，例如 PAINS 基序和合成上难以获得的结构。 基于摩根指纹图谱进行分子聚类分析，提取靠近每个聚类中心的分子，形成类药物且可合成的多样性库。 这些选定的分子拥有 805,822 个独特的 Bemis-Murcko 支架 (BMS)，具有多样化的化学空间。 强烈推荐该库用于基于人工智能的先导化合物发现、超大规模虚拟筛选和新的先导化合物的发现。
  膜受体靶向化合物库	4.2K  HY-L150	• 4333种膜受体靶向化合物独特集合。 • FGFR、TRP 通道、VEGFR、TNF 受体、阿片受体、5-HT 受体、离子通道等靶点。
  片段化合物库	22K  HY-L032	• 独特的21965 个片段化合物集合，用于通过高通量筛选(HTS) 进行传统先导化合物鉴定。 • 基于片段的药物发现方法(FBDD) 的有用工具。
  中药单体化合物库	2.7K   HY-L065	• 独特的2712 种中药活性化合物集合，用于高通量筛选(HTS) 和高内涵筛选(HCS)。 • 库中的化合物包含糖类和糖苷、苯丙素、醌类、黄酮类、萜类和糖苷、类固醇、生物碱、酚类、酸类和醛类。

  这些库可在 MCE（MedChemExpress，第三方供应商）中找到， 我们可以与 MCE 合作使用它们。 我们拥有的一个是中药单体化合物库。

• 来自 Targetmol（第三方供应商）的化合物库

  名称	规格及货号	简介
  2600万虚拟筛选库	26M	由Targetmol整理的开源数据库，收录了全球主要的筛选化合物产品数据，包含千万级的化合物结构，致力于为全球科研人员提供一个稳定可靠的数据库。
  100K多样性预制化合物库	100K & DS7000	基于160万筛选化合物和130亿类药和类先导化合物的虚拟空间精心挑选而出，旨在提供新颖的化学结构。
  多样性核心预制库	50K & LF1000	精心挑选50000种具有优良理化特性的类药分子，以较小的化合物数量实现结构多样性的筛选目的。这些化合物基于新合成的化合物集合，使用结构差异性方法筛选而出。
  EXP多样性库	50K & CB1100	基于50万类先导和类药化合物集合精心挑选而出，旨在提供多样的化学结构，并呈现出良好的类药和类先导特性，适用于多种研究目的使用
  药物靶点库	53K & DO1200	基于“靶点多样性”概念和现有数据，通过计算机虚拟筛选、结构生物学、体外、细胞和表型预测等多种工具，对Chemdiv 160万个化合物进行筛选，得到5.3万个类药分子，涵盖200多个药物靶点。
  多样性核心库Part1	50K & DF4500	精选5万种化合物，覆盖160万种化合物的结构空间。该库在剔除PAINS、经过REOS和MedChem过滤器后，专注优化化合物结构的多样性。
  代表性核心库（基于Bemis-Murcko Clustering算法）	300K & DD3700	基于Bemis-Murcko-clustering理论生成BMS骨架，经聚类分析、类药性质分析，获得的多样性库。
  DGK抑制剂库	12K & L9920	收集880余种DGK抑制剂分子作为模板分子，然后分别使用3D药效团建模和子结构搜索筛选/生物等排替代方式对160万小分子进行筛选构建而成。
  共价抑制剂库	12K & DO2200	Chemdiv共价抑制剂库旨在覆盖用作共价反应基团的常见弹头，另外从库存的砌块化合物中选取多样的特有和独特结构作为导引头，设计合成各类共价抑制剂。共价抑制剂通用库包含了各类常见的共价反应基团化合物。
  CNS MPO库	30K & DP2250	使用gMPO对Chemdiv 160万库存化合物进行筛选评估，选取评分不低于4的化合物；然后利用药化过滤器进行筛选，结构富集，最终得到此库。
  3D生物活性多样性库	22K & D8800	该库收集的小分子具有较好的核心骨架结构、三维空间结构和药效团，展示出广泛的生物学活性，它们潜在的靶标包括酶、膜受体、转录因子、表观遗传调节剂、离子通道、转运蛋白和其他蛋白质，同时具有良好的ADMET性能。该库包括蛋白质抑制剂/激活剂和受体激动剂/拮抗剂，活性化合物具有较低的分子量，较佳的LogP值和较佳的溶解度。
  已知活性化合物库	22K & L4010	已知活性库是 22555 个具有生物活性，能引起细胞、组织甚至个体生物学反应的化合物的集合。包括了正在进行临床前研究的药物分子，临床期的药物分子和已经上市的药物。靶点明确，信息全面，非常适合完成药物功能重定位、小分子诱导细胞分化以及机制研究中蛋白靶点确认等科研工作。
  天然产物库	4533 & L6000	TargetMol天然产物库精选了4533 种天然产物单体，这些天然产物单体来源丰富，结构多样，具有很强的代表性。它们存在于三千余种中草药植物、动物以及微生物中提取纯化的天然来源中，涵盖了五百余种不同骨架结构和千余种靶点受体，大部分成分都达到对照品纯度。不仅如此，库中还包含了众多单价极高的稀有天然产物，性价比高。

  这些库可在Targetmol（TargetMol Chemicals，第三方供应商）中找到， 我们可以与TargetMol合作使用它们。
• 参考文献：
  [1] Coma, I. et al. Process validation and screen reproducibility in high-throughput screening. J. Biomol. Screen. 14, 66–76 (2009).doi: 10.1177/1087057108326664
  [2] Paweł Szymański, Magdalena Markowicz,* and Elżbieta Mikiciuk-Olasik. Adaptation of High-Throughput Screening in Drug Discovery—Toxicological Screening Tests. Int J Mol Sci. 2012; 13(1): 427–452.Published online 2011 Dec 29. doi: 10.3390/ijms13010427

各种相关实验性室

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